PAK遮断/D3 強化剤の迅速なスクリーニング法: CYP24 遺伝子プロモーター + GFP 融合遺伝子 (GM)

我が輩は80を越え、流石に「老骨」になったが、足腰と頭だけは、未だ健在！ そこで、亡父の口癖に従い、「生きている内に頭を働かせ」てみた。

結果的には、20年ほど昔に、線虫で開発された GM遺伝子「CL2070」の 改良版になるが。 CL2070 では、熱ショック蛋白遺伝子(16.2) のプロモーター部 分に蛍光蛋白 (GFP) の遺伝子部分を融合して、プロモーターがPAK遮断剤によっ て、活性化されると、透明な線虫が GFPで、緑色の蛍光に輝く仕組みである。こ の仕組みで、PAK遮断剤="健康長寿" 剤がスクリーニングできる。

さて、我が輩の融合遺伝子 (仮称: PRF2025) では、CYP24 遺伝子プロモーターに GFP遺伝子を融合後、(RAS癌) 培養細胞は、 GFP蛍光で輝くが、細胞をPAK遮断/D3 強化剤 (CYP24遺伝子を抑制) で処理すると、蛍光が瞬く間に、抑制される仕組み である。 96個のプレート (Micro-titer plate) で、多数の薬剤が「蛍光」を指標に、敏速にスクリーニ ングできる。 問題は、先ず、(PAK遮断剤などにより抑制される) 「CYP24 遺伝子 プロモーター」部分を同定する作業に始まる。。。

According to a 2005 Ph. D. thesis (19 pages) by a Chinese student at Adelaide University in Australia: https://digital.library.adelaide.edu.au/dspace/bitstream/2440/37863/9/01front.pdf One of the key promoters on this gene is activated by a transcription factor called "ETS", which is activated by the oncogenic PAK1-ERK-JNK signaling pathway. Thus, in theory, this ETS-binding site (from -132 to -119) of CYP24 gene (promoter) could be used for linking to GFP (or Luciferase) gene.
For detail, see the following article (published in 2005):
Biochem J. 389(Pt 3):753-62.
Molecular action of 1,25-dihydroxyvitamin D3 and phorbol ester on the activation of the rat cytochrome P450C24 (CYP24) promoter: role of MAP kinase activities and identification of an important transcription factor binding site
Barbara K Nutchey, Josef S Kaplan, Prem P Dwivedi, John L Omdahl, Antonio Ferrante, Brian K May, Charles S T Hii (2005).
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15836435/